伊莎贝尔一世（西班牙语：Isabel I la Católica；1451年4月22日－1504年11月26日）是卡斯蒂利亚王国和莱昂王国的女王。她及丈夫兼堂弟费尔南多二世 (阿拉贡)完成了收复失地运动，为日后他们的外孙查理五世 (神圣罗马帝国)统一西班牙帝国奠定了基础。其支援克里斯托弗·哥伦布开拓美洲新大陆，为开拓发展西方世界作出重大的贡献。另外他重用的弗朗西斯科·希梅内斯·德·西斯内罗斯枢机大力提升王权并压制了贵族的跋扈，让王权借由“宗教裁判所深入到基层民众，让人民成为教会的顺民，以及王室的顺民。”
生平继位
1454年伊莎贝尔一世的父亲卡斯蒂利亚王国国王胡安二世 (卡斯蒂利亚)过世后，她的同父异母兄长恩里克四世 (卡斯蒂利亚)继承王位。1469年10月19日她私自和强迫堂弟阿拉贡王国王储费尔南多二世 (阿拉贡)联姻。
1474年，恩里克四世过世，只有一个女儿卡斯蒂利亚的乔安娜，恩里克四世被权贵们指为“不能人道，无法生育”，而卡斯蒂利亚的乔安娜是他亲信和王后的私生子。当时卡斯蒂利亚的乔安娜已经嫁给了葡萄牙国王阿方索五世 (葡萄牙)。伊莎贝尔一世迅速继承了王位。阿方索五世 (葡萄牙)发兵声称卡斯蒂利亚的乔安娜应该继承王位，但1476年在托罗一役彻底失败。阿方索五世被迫签署阿尔卡索瓦什和约，放弃对卡斯蒂利亚王国王位的一切要求。1478年伊莎贝尔一世在天主教会教宗的批准下成立西班牙宗教裁判所，迫害非天主教人士并大力提升了王权。1479年费尔南多二世 (阿拉贡)的父王过世，费尔南多二世 (阿拉贡)和伊莎贝尔一世成为阿拉贡和卡斯蒂利亚王国的国王、女王。1480年这对夫妇召集群臣和34位平民代表制定了一系列法律、为未来的西班牙奠定了法理基础。
伊莎贝尔一世任内时常召开名为“卡斯蒂利亚法院（西班牙语：Cortes de Castilla）”的国家议会，并且将大部分的行政权托付给“卡斯蒂利亚王国会议”。卡斯蒂利亚王国会议的成员由王室任命，是推行专制政治的有力新工具。她与中产阶级联手对抗贵族阶级，并以城镇的民兵为其军事力量的后盾，她又将传统封建贵族的三大军团交由丈夫兼堂弟费尔南多二世 (阿拉贡)掌管、压制，解除了贵族的军事威胁。她对于牧羊业老板所组的“马士达”公会堂则较为纵容，因为政府的税收主要来自牧羊业，这种情形一直持续到新大陆的财富大量输入西班牙之前。
1492年
1492年1月2日，伊莎贝拉一世和费尔南多二世 (阿拉贡)的军队攻下了统治伊比利亚半岛南部七个世纪的摩尔人的最后一个重镇格拉纳达，完成在伊比利亚半岛基督教势力对伊斯兰教势力数个世纪的征战收复失地运动。
同年，在对克里斯托弗·哥伦布向西航海去印度的计划三次拒绝之后，伊莎贝拉一世终于同意资助克里斯托弗·哥伦布的探险。由于财政吃紧，伊莎贝尔一世拿出一个自己的装满首饰的首饰盒给克里斯托弗·哥伦布作为资助，同时答应克里斯托弗·哥伦布的条件：他和他的后代做为西班牙开拓的殖民地的总督，并获得一成的利润。8月3日克里斯托弗·哥伦布启航。次年携带着一些美洲原住民和金凯旋，西班牙从此进入了海外冒险和殖民的地理大发现。1494年，伊莎贝拉一世和费尔南多二世 (阿拉贡)通过《托德西利亚斯条约》和葡萄牙瓜分了世界。伊莎贝拉一世曾经试图为了保护印第安人免受西班牙殖民者的虐待而组建了一个美洲原住民事务处。但后来的西班牙征服者并没有遵守女王的规定，反而极力迫害美洲原住民。
1492年3月31日，伊莎贝拉一世和费尔南多二世 (阿拉贡)颁布阿罕布拉法令，把西班牙的犹太人和穆斯林驱逐。大约有20万人被迫离开家园，剩下的被迫皈依基督教，并在日后再次遭到迫害。
晚年
伊莎贝尔一世和费尔南多二世 (阿拉贡)在统一西班牙之后试图利用西班牙宗教裁判所在精神层面把全国统一在天主教会之下。1502年，西班牙的穆斯林被迫在接受洗礼皈依基督教和离开西班牙之间作选择。他们还试图通过联姻和欧洲其他列强联合，以达到制衡法国和统一伊比利亚半岛的目的。
伊莎贝尔一世死后把所有称号给了女儿胡安娜 (卡斯蒂利亚)继承，胡安娜的丈夫，来自哈布斯堡王朝的费利佩一世 (卡斯蒂利亚)在伊莎贝尔一世死后和费尔南多二世 (阿拉贡)反目，但在内战爆发前病死。费尔南多二世 (阿拉贡)的儿子查理五世 (神圣罗马帝国)成为西班牙王位的继承人，其治下的西班牙帝国达到空前的强大。
伊莎贝尔一世被安葬在格拉纳达的王家教堂。
子女伊莎贝尔一世 (卡斯蒂利亚)和费尔南多二世 (阿拉贡)育有五个子女：
- 阿拉贡的伊莎贝尔 (1470-1498)（1470年10月1日－1498年8月23日）——先是嫁给了葡萄牙王储阿方索（英语：Afonso, Prince of Portugal），在后者过世后嫁给了他的叔父葡萄牙国王曼努埃尔一世 (葡萄牙)，随后因难产而过世，其子在两岁时夭折。
- 胡安 (阿斯图里亚斯亲王)（1478年6月28日－1497年10月4日）——在和哈布斯堡王朝的奥地利的玛格丽特 (萨伏伊公爵夫人)结婚之后6个月过世，没有子嗣。
- 胡安娜 (卡斯蒂利亚)（1479年11月6日－1555年4月13日）——嫁给了神圣罗马帝国皇帝马克西米利安一世 (神圣罗马帝国)之子费利佩一世 (卡斯蒂利亚)，并和后者一起统治卡斯蒂利亚。她的儿子是第一位西班牙国王查理五世 (神圣罗马帝国)。
- 阿拉贡的玛丽亚 (1482-1517)（1482年6月29日－1517年3月7日）——在其姐姐阿拉贡的伊莎贝尔 (1470-1498)过世后嫁给姐夫曼努埃尔一世 (葡萄牙)，育有六个子女。
- 阿拉贡的凯瑟琳（1485年12月15日－1536年1月7日）——先是嫁给了年幼自己9个月的威尔士亲王亚瑟·都铎，在后者过世后嫁给了他的弟弟年幼自己7岁的英格兰国王亨利八世。育有两子两女，他们唯一存活的子女是英国女王血腥玛丽。
- ^ 中国大陆或依照英文（Isabella I of Castile）译为伊莎贝拉一世。
